一、基因工程的基本工具
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限制酶
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DNA连接酶
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载体
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作用
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切割目的基因和载体
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连接DNA片段，形成重组DNA
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携带目的基因进入受体细胞
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作用部位
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两核苷酸的脱氧核糖与磷酸间形成的磷酸二酯键
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作用特点(条件)
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(1)识别特定的核苷酸序列；(2)在特定位点上切割
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(1)E·coli DNA连接酶只连接黏性末端；(2)T4DNA连接酶连接黏性末端和平末端
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(1)能在宿主细胞内稳定存在并大量复制；(2)有多个限制酶切割位点；(3)具有特殊的标记基因
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常用类型
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EcoRⅠ限制酶SmaⅠ限制酶
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E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶
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质粒、噬菌体、动植物病毒
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训练1 下列有关基因工程技术的正确叙述是 ( )
A．重组DNA技术所用的工具酶是限制酶、连接酶、载体
B．为育成抗除草剂的作物新品种，导入抗除草剂基因时只能以受精卵为受体细胞
C．选用细菌作为重组质粒的受体细胞是因为细菌繁殖快
D．只要目的基因进入了受体细胞就能成功表达
二、基因工程的操作程序
1．目的基因的获取
(1)目的基因：指编码蛋白质的结构基因。
(2)获取方法：从基因文库获取，原核基因也可直接分离获得；真核基因主要是人工合成，人工合成目的基因的常用方法有反转录法和化学合成法。
2．基因表达载体的构建
(1)目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。
(2)组成：启动子＋目的基因＋标记基因＋终止子。
①启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需要的蛋白质。
②终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的尾端。
③标记基因的作用：鉴定受体细胞中是否含有目的基因，从而将含有目的基因的细胞筛选出来。常用的标记基因是抗生素抗性基因。
