一、基因工程的操作程序
(1)目的基因的获取途径有:从基因文库中获取、PCR技术扩增、化学法人工合成。
(2)基因表达载体的构建:是基因工程的重要环节,需要用同种限制酶分别切割载体和目的基因,再用DNA连接酶把两者连接,基因表达载体包括标记基因、启动子、终止子和目的基因。
(3)将目的基因导入受体细胞:
植物细胞: 农杆菌转化法
动物细胞: 显微注射法
微生物细胞:感受态细胞法
(4)目的基因的检测和鉴定:
1)分子水平上的检测
检测是否插入目的基因:利用DNA分子杂交技术
检测是否转录出了mRNA:利用分子杂交技术
检测是否翻译成蛋白质:抗原-抗体杂交