1．(2016·全国卷Ⅲ)图a中的三个DNA片段上依次表示出了EcoRⅠ、BamHⅠ和Sau3AⅠ三种限制性核酸内切酶的识别序列与切割位点，图b为某种表达载体的示意图(载体上的EcoRⅠ、Sau3AⅠ的切点是唯一的)。
根据基因工程的有关知识，回答下列问题：
(1)经BamHⅠ酶切后得到的目的基因可以与上述表达载体被________酶切后的产物连接，理由是____________________________________________。
(2)若某人利用图b所示的表达载体获得了甲、乙、丙三种含有目的基因的重组子，如图c所示。这三种重组子中，不能在宿主细胞中表达目的基因产物的有________，不能表达的原因是________________________________
___________________________________________________________________。
图c
(3)DNA连接酶是将两个DNA片段连接起来的酶，常见的有________________和________________，其中既能连接黏性末端又能连接平末端的是______________________。
答案 (1)Sau3AⅠ 两种酶切割后产生的片段具有相同的黏性末端
(2)甲和丙 甲中目的基因插入在启动子的上游，丙中目的基因插入在终止子的下游，二者的目的基因均不能被转录(其他合理答案也可)
(3)E·coliDNA连接酶 T4DNA连接酶 T4DNA连接酶
解析 (1)分析图a可知，限制酶Sau3AⅠ与BamHⅠ切割DNA后形成的黏性末端相同，故经这两种酶切割得到的产物可以用DNA连接酶进行连接。
(2)构建基因表达载体时，为保证目的基因能在宿主细胞中成功表达，目的基因应插入在启动子和终止子之间，据此可判断甲、丙均不符合要求，目的基因均不能表达。
(3)常见的DNA连接酶有E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶，其中T4DNA连接酶既能连接黏性末端又能连接平末端。
归纳与DNA相关的六种酶
|
名称
|
作用部位
|
作用底物
|
作用结果
|
|
限制酶
|
磷酸二酯键
|
DNA
|
将DNA切成两个片段
|
|
DNA连
接酶
|
磷酸二
酯键
|
DNA片段
|
将两个DNA片段连接为一个DNA分子
|
|
DNA聚合
酶或热稳定
DNA聚合酶
|
磷酸二
酯键
|
脱氧
核苷酸
|
将单个脱氧核苷酸依次连接到DNA单链末端
|
|
DNA
(水解)酶
|
磷酸二
酯键
|
DNA
|
将DNA片段水解为单个脱氧核苷酸
|
|
解旋酶
|
碱基对之
间的氢键
|
DNA
|
将双链DNA分子局部解旋为单链，形成两条长链
|
|
RNA
聚合酶
|
磷酸二
酯键
|
核糖
核苷酸
|
将单个核糖核苷酸依次连接到RNA单链末端
|
