1.基因工程操作的基本程序
(1)目的基因的获取。
(2)基因表达载体的构建。
(3)将目的基因导入受体细胞。
(4)目的基因的检测与鉴定。
2．目的基因的获取
(1)目的基因概念：主要指编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子。
(2)目的基因的来源
①从生物中直接获取。
②人工合成的方法合成。
(3)目的基因获取方法
①从基因文库中获取
a．前提条件：目的基因序列未知。
b．基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因。
d．构建过程
e．提取依据：根据基因的有关信息，如基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA以及基因的表达产物蛋白质等特性来获取目的基因。
②利用PCR技术扩增目的基因
a．PCR含义：是多聚酶链式反应的缩写，是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。
b．PCR原理：DNA双链复制。
c．前提条件：有一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。
d．要求
模板：目的基因两条链
原料：dNTP
酶：热稳定DNA聚合酶(Taq酶)
引物：人工合成的两条DNA片段(引物1，引物2)
e．扩增过程
f．方式：指数形式扩增(2n，n为扩增循环的次数)
g．结果：获得大量目的基因
③人工合成
a．前提条件：核苷酸序列已知，基因比较小。
b．方法：通过DNA合成仪用化学方法直接人工合成。
1.所有的目的基因都可以从基因文库中获得吗？
提示：不可以。基因文库包括部分基因文库(如cDNA文库)和基因组文库，前者含有某生物的部分基因，不可能从中获得全部目的基因，后者包含该生物的所有基因，可以获得所有的目的基因。
2．PCR过程中需要解旋酶吗？所需要的DNA聚合酶应具有什么特点？
提示：PCR过程中，DNA双链解开是在高温下完成的，不需要解旋酶；由于PCR过程温度较高，所以需要能耐高温的DNA聚合酶。
