1．抽提液的选择
2．分离蛋白质的方法
(1)离心沉降法：通过控制离心速率，使分子大小、密度不同的蛋白质发生沉降分层。
(2)薄膜透析法：利用蛋白质分子不能透过半透膜的特性，使蛋白质与小分子化合物分离开的纯化蛋白质的方法。
(3)凝胶色谱法
①概念：根据蛋白质分子的大小对其进行有效分离的方法。
②凝胶
③原理
|
|
是否进
入凝胶
颗粒
|
移动途径
|
路程
|
移动
速度
|
洗脱
次序
|
|
大分子
蛋白质
|
不能
进入
|
凝胶颗粒
间隙
|
较短
|
较快
|
先洗
脱出来
|
|
小分子
蛋白质
|
可以
进入
|
凝胶颗
粒内部
|
较长
|
较慢
|
后洗
脱出来
|
(4)电泳法：将所带电荷的数量和性质不同的蛋白质从混合样品中分离并纯化出来。
3．血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳
配制试剂―→准备器材―→架滤纸桥―→浸泡薄膜―→细心点样―→平悬薄膜―→实施电泳―→染色―→漂洗―→脱色。
探讨：在抽提液中加入蛋白酶抑制剂的目的是什么？
提示：防止提取过程中蛋白质被蛋白酶分解。
探讨：在电泳过程中，影响泳动速度的因素有哪些？
提示：带电颗粒的性质，即颗粒的大小、形状和所带电荷的多少；此外还有电场强度、溶液的pH等因素。
探讨：洗涤红细胞时能否用蒸馏水代替生理盐水？
提示：不能。生理盐水能保持红细胞的渗透压稳定而不至于破裂，在未洗净血浆中的杂质蛋白前，红细胞如果提前破裂，就可能使血红蛋白质与杂质血浆蛋白混在一起加大了分离的难度。
