1.重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)是临床血栓疾病治疗的主要生物药品。家兔具有多胎、妊娠期短、繁殖快、全年多发情,产仔率高等优点,可以作为乳腺生物反应器批量生产药物。下图是利用转基因兔生产重组人纤溶酶原激活剂(rhPA)的过程,请据图回答。
(1)构建rhPA基因表达载体需要用限制酶________切割质粒和目的基因,为获得乳腺特异性表达载体需用________酶切割重组质粒使之线性化。
(2)对母兔注射________使其超数排卵,并与正常公兔配种。将乳腺特异性表达载体导入家兔受精卵中最有效的导入技术是________。
(3)将受精卵置于37 ℃的________的气体环境中培养一段时间后移植到代孕兔的输卵管中,代孕兔需经________处理。
(4)子代兔需要经过筛选过程才能获得生产人纤溶酶原激活剂的生物反应器,原因有________、________。
解析 (1)分析图示可知:构建rhPA基因表达载体时,目的基因(rhPA基因)插入到了质粒上的XhoⅠ酶切位点的下方,说明是用限制酶XhoⅠ切割质粒和目的基因的。依据乳腺特异性表达载体的组成可知:为获得乳腺特异性表达载体,使重组质粒线性化,需用SalⅠ和NotⅠ酶进行切割。(2)对母兔注射促性腺激素使其超数排卵,并与正常公兔配种。将乳腺特异性表达载体导入家兔受精卵中,常采用的最有效的导入技术是显微注射技术。(3)将受精卵置于37 ℃的95%空气和5%CO2的气体环境中培养一段时间后,移植到经同期发情(孕激素)处理的代孕兔的输卵管中,以使该受精卵继续发育为子代。(4)由于只有部分子代兔导入了人纤溶酶原激活剂基因,而且公兔不能表达人纤溶酶原激活剂,所以子代兔需要经过筛选过程才能获得生产人纤溶酶原激活剂的生物反应器。
答案 (1)XhoⅠ SalⅠ和NotⅠ
(2)促性腺激素 显微注射技术
(3)95%空气和5%CO2 同期发情(孕激素)
(4)只有部分子代兔导入了人纤溶酶原激活剂基因 公兔不能表达人纤溶酶原激活剂