1．(2018·河北衡水中学十五模)请回答下列有关生物技术实践方面的问题：
(1)培养基配制的步骤为：计算→称量→________→________→倒平板；为统计样品中活菌的数目，在 37 ℃培养箱中培养适当时间后形成菌落，一般选择菌落数在________的平板进行计数。
(2)泡菜虽然好吃，但其中的亚硝酸盐会危害人体健康。亚硝酸盐在特定条件下会转变成________，这是一种致癌物，测定亚硝酸盐含量的原理是在__________条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸反应后，与N－1－萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色物质。
(3)腐乳制作的流程：让豆腐上长出毛霉→加盐腌制→加卤汤装瓶→密封腌制。配制卤汤时，要使卤汤中酒的含量控制在________左右。
(4)某同学采用血细胞计数板计数(规格为16×25，0.1 mm3)，统计4个中格中的细菌数，计算出每个小格所含细菌的平均数为2个，则每毫升样品中的细菌数是(稀释倍数为103)________个。
(5)对于频繁使用的菌种可将试管放入________保藏。
答案 (1)溶化 灭菌 30～300 (2)亚硝胺 盐酸酸化 (3)12% (4)8×109 (5)4 ℃冰箱
解析 (1)培养基配制的步骤：按配方计算培养基中各种成分的用量→称量(一般动作要迅速一些，因为其中可能有些成分容易吸潮)→溶化(将称好的各种成分溶解在水中，如果是固体培养基，需要使用凝固剂，如琼脂等；溶化时，注意搅拌，防止糊底)→灭菌(高压蒸汽灭菌)→倒平板；选择菌落数在30～300的平板进行计数，是因为在这个范围内，各个菌落之间的营养竞争不是特别剧烈而不会对菌落的形成造成比较大的干扰，同时也能在数菌落过程中让人眼有效分辨出各个菌落。
(2)亚硝酸盐在特定条件下(适宜的pH、温度和一定的微生物作用)转变为亚硝胺。亚硝胺具有很强的致癌、致畸、致突变作用，对人体有害；在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，再与N－1－萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色物质。
(3)在卤汤中加酒，作用有二：其一是抑制微生物生长；其二是调味。但要求控制好量，一般要控制在12%左右。
(4)血细胞计数板计数(规格为16×25,0.1 mm3)，每个小格所含细菌的平均数为2个，稀释倍数为103，则每毫升样品中的细菌数＝2÷0.1×1000×16×25×103＝8×109个。
(5)为了保持菌种的纯净，需要进行菌种的保藏。对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法，将已长成菌落的试管放入4 ℃冰箱中保藏。
2．(2018·唐山三模)为了研究新型抗生素X对细菌E·coli 和S·albus的杀菌效果，做了如下实验：
①配制培养基(成分：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、H2O等)；
②制作无菌平板；
③设置空白对照组和若干实验组，进行相关操作；
④将各组平板置于37 ℃恒温箱中培养一段时间，统计各组平板上菌落情况。
回答下列问题：
(1)该培养基中微生物所需的氮来源于________________________。
(2)灭菌是指使用强烈的理化因素________________________________。
(3)步骤③中，实验组的操作是利用______________法将两种细菌分别接种在培养皿中，然后将分别沾有不同浓度抗生素X的直径3 mm的圆纸片，放在布满细菌的培养基表面上。一段时间后，测得圆纸片周围清晰区的直径数据如下：
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细菌
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不同浓度抗生素下清晰区直径(mm)
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0.5 万单位
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1万单位
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5万单位
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10万单位
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E·coli,7,15,16,16
S·albus,－,8,13,17
比较1万和10万单位抗生素X在控制E·coli和S·albus方面的效果：________________________________________________________________________
________________________________________________________________________。
(4)请从进化的角度分析滥用抗生素的危害。
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答案 (1)牛肉膏、蛋白胨
(2)杀死物体内外所有微生物，包括芽孢和孢子
(3)稀释涂布平板 在控制S·albus方面，10万单位抗生素X的效果明显优于1万单位抗生素X；在控制E·coli方面，两种浓度的抗生素X无明显差异
(4)滥用抗生素可能会加速筛选出大量抗生素抗性细菌，使抗性基因的基因频率不断变大，细菌种群朝着抗抗生素的方向进化。
解析 (1)牛肉膏和蛋白胨都含有有机氮，都可以作为氮源。
(2)灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
(3)实验室常用稀释涂布平板法与平板划线法将细菌接种于培养基上，本实验需将菌种均匀分布到培养基表面，因此采用稀释涂布平板法接种。圆纸片周围清晰区的直径越大，说明抗生素X对细菌的杀灭效果越好。分析表格数据可知，在控制S·albus方面，10万单位抗生素X的效果明显优于1万单位抗生素X，在控制E·coli方面，两种浓度的抗生素X无明显差异。
(4)滥用抗生素不断淘汰不耐药的细菌，导致耐药菌的比例增大，因此会加速筛选出大量抗生素抗性细菌，使细菌种群朝着抗抗生素的方向进化。
