1.(13分)透明质酸酶在临床上常用作药物渗透剂,目前主要从动物组织中提取。科研人员尝试将透明质酸酶基因转入大肠杆菌,使其得到高效表达。下图中NcoⅠ和XhoⅠ为限制酶,重叠延伸PCR是一种定点突变技术。据图回答下列问题:
(1)步骤①的目的是为了保护
,PCR的原理是 ;PCR扩增的过程是目的基因DNA受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,然后 ,如此重复循环。
(2)若图中的透明质酸酶基因来自cDNA文库,则在进行步骤②之前需在其前、后端分别接上特定的 ,否则该基因就不能转录。步骤②需要用 (酶)切割质粒。
(3)图中A是 ;早期实验人员利用大肠杆菌作为受体,后来发现用毛霉或酵母菌作受体更具优势,从生物体结构角度分析,最可能的原因是 。
(4)目的基因导入受体细胞后,是否可以稳定地维持和表达其遗传特性,只有通过检测和鉴定才能知道。检测转基因生物DNA上是否插入了目的基因的方法是
。
解析:(1)图中目的基因的中间存在NcoⅠ限制酶的切割位点,因此步骤①的目的是为了保护透明质酸酶基因,防止NcoⅠ限制酶破坏目的基因。PCR的原理是DNA双链复制;PCR扩增的过程是高温变性→低温退火→中温延伸。即目的基因DNA受热变性后解链为单链,引物与单链相应互补序列结合,然后在DNA聚合酶作用下延伸,如此重复循环。
