1.(2018浙江金丽衢十二校8月高三第一次联考)某同学要从土壤中分离出能分解尿素的细菌,并统计单位体积土壤样液的活菌数目。按照培养基的配方称取,并将各种物质溶解后,用蒸馏水定容、灭菌,制成固体培养基备用。回答下列问题。
(1)配制该培养基应加入的凝固剂和显色剂分别是 ,加入培养基的三角瓶需用_______________________盖上后灭菌。
(2)培养分解尿素的细菌时,在接种前需要检测培养基是否被污染。采用的检测方法是 __________ 。
(3)若要统计土壤样品中尿素分解菌的数目,宜采用 法接种,根据土壤样品的稀释倍数和接种稀释液的体积,统计平板上的菌落数目就能大约推测出样品中的活菌数。一同学在稀释倍数为10-4的培养基中测得平板上菌落数的平均值为24.6,则每升样品中的活菌数是 个。与血细胞计数板计数法相比,此计数方法测得的菌体数较 ,其原因是 _____________________ 。
答案(1)琼脂糖和酚红(顺序不可颠倒) 封口膜 (2)将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时间(或37 ℃恒温箱中培养),观察培养基上是否有菌落产生 (3)稀释涂布平板 2.46×109 少 由于两个或多个细菌连接在一起,往往统计的是一个菌落或死菌未计入,故用此方法测得的细菌数偏低(其他合理答案也可)
解析(1)从土壤中分离能分解尿素的细菌用尿素作为唯一氮源,凝固剂要加入琼脂糖,显色剂用酚红。灭菌时三角瓶要用封口膜盖住。(2)检测培养基是否被污染,将未接种的培养基在适宜温度下放置适宜的时间(或在37 ℃恒温箱中培养),观察培养基上是否有菌落产生,若没有菌落出现,说明没有污染。(3)稀释涂布平板法可用于计数。由于两个或多个细菌连接在一起,往往统计的是一个菌落或死菌未计入,故用此方法测得的细菌数偏低。稀释109倍,接种0.1 mL平板菌落平均值为24.6,则每升活菌数为2.46×109个。
2.回答与微生物培养及应用有关的问题。
(1)对培养基进行高压蒸汽灭菌时,灭菌时间应从________________________________ 时开始计时。对于不耐热的液体培养基,一般可将其转入G6玻璃砂漏斗中,采用 方式可较快地进行过滤灭菌。
(2)与酿造果醋相比,利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋,需增加_____________ 的过程。某醋化醋杆菌培养基由蛋白胨、酵母提取物和甘露醇组成,其中甘露醇的主要作用是 。
(3)为筛选胞外α-淀粉酶分泌型菌种,一般从 (A.果园树下 B.肉类加工厂周围 C.米酒厂周围 D.枯树周围)获得土样,用无菌水稀释,涂布到含有淀粉的选择培养基上培养,一段时间后在培养基表面滴加碘液,可在菌落周围观察到透明的水解圈。若要筛选酶活性较高的菌种,需挑选若干个___________________ 比值大的菌落,分别利用液体培养基振荡培养进行扩增。然后将培养液离心,取 用于检测酶活性。
(4)植物组织培养时,先配制MS培养基,再加入一定比例的植物激素,当生长素相对较多时,可促进 。
(5)植物组织培养和微生物培养都需要无菌操作,下列不适宜用高压蒸汽灭菌的是( )
A.接种环和镊子
B.三角瓶和广口瓶
C.发芽培养基和生根培养基
D.用于培养的幼茎和幼芽
答案(1)达到设定的温度或压力值 抽滤
(2)将淀粉分解成糖 作为碳源
(3)C 水解圈直径与菌落直径 上清液
(4)生根
(5)D
解析(1)对培养基进行高压蒸汽灭菌时,灭菌时间应从达到一定压强(或自主设定的压强或温度值)时开始计时。对于不耐热的液体培养基,一般可将其转入G6玻璃砂漏斗中,采用抽滤方式可较快地进行过滤灭菌。(2)与酿造果醋相比,利用大米、高粱等富含淀粉的原料制醋,需增加将淀粉水解为糖的过程。某醋化醋杆菌培养基由蛋白胨、酵母提取物和甘露醇组成,其中甘露醇的主要作用是作为碳源,并维持反应体系的渗透压。(3)胞外α-淀粉酶分泌型菌种,主要存活在含有大量淀粉的场所,C项符合题意。微生物在选择培养基上生长时,消耗相应物质,本题目中淀粉被水解消耗,会出现淀粉的水解圈,可通过判断水解圈与菌落直径比值确定菌种的分解能力,一般该比值越大,分解能力越强。该实验获取的是胞外α-淀粉酶,因此离心后取上清液用于检测酶活性。(4)植物组织培养中生长素相对较多时,有利于生根,而细胞分裂素相对较多时,则有利于生芽。(5)高压蒸汽灭菌常用于培养基、培养器材等的灭菌,而用于培养的幼茎和幼芽则不能进行任何灭菌操作,否则会导致细胞死亡。
